何谓PCR简单的说,PCR就是利用DNA聚合酶对特定基因做体外或试管内 In Vitro 的大量合成。基本上它是利用DNA聚合酶进行专一性的连锁复制.目前常用的技术,可以将一段基因复制为原来的一百亿至一千亿倍。
PCR的要素
基本的PCR须具备
1.要被复制的DNA模板 Template
2.界定复制范围两端的引物Primers.
3.DNA聚合酶 Taq. Polymearse
4.合成的原料及水。
PCR的反应包括三个主要步骤:分别是1. Denaturation 2. Annealing of primers,3. Extension ofprimers。 所谓 Denaturing乃是将DNA加热变性, 将双股的DNA加热后转为单股DNA以做为复制的模板. 而Annealing 则是令 Primers于一定的温度下附着于模板DNA两端。 最后在DNA聚合酶 e.g. Taq-polymerase 的作用下进行引物的延长 Extension of primers及另一股的合成。
PCR的最早设想 核酸研究已有100多年的历史,本世纪60年代末、70年代初人们致力于研究基因的体外分离技术,Korana于1971年最早提出核酸体外扩增的设想:“经过DNA变性,与合适的引物杂交,用DNA聚合酶延伸引物,并不断重复该过程便可克隆tRNA基因”。
PCR的实现
1985年美国PE-Cetus公司人类遗传研究室的Mullis 等发明了具有划时代意义的聚合酶链反应。其原理类似于DNA的体内复制,只是在试管中给DNA的体外合成提供以致一种合适的条件---摸板DNA ,寡核苷酸引物,DNA聚合酶,合适的缓冲体系,DNA变性、复性及延伸的温度与时间。